乌梢蛇繁殖，首先是乌梢蛇的种蛇选择，一般会选择蛇龄在3岁以上，体重在400克以上的体质强壮、无伤病、生长发育良好、活泼活跃、爬行灵活、蜷缩能力强、动作迅猛有力、繁殖能力强的优良种类蛇，配种雌性、雄性蛇的比例为5~8：1来进行配种，其次乌梢蛇的孵化器多采用大口缸罐、桶或者箱子作为容器。
一、乌梢蛇雌雄的鉴别
乌梢蛇雌雄体相近，雄乌梢蛇头大，腹鳞小，尾下磷多，特别是尾基部雌蛇长，有一对“半阴茎“稍微膨胀一点。最正确的鉴别方法是将乌梢蛇后半部分的腹面向上，找到肛门孔后，用拇指按住肛门孔后面的几厘米，从后面向前推，肛孔有一对“半阴茎“伸出。雌蛇的头部比雄蛇小一点，腹鳞多，尾下鳞少，尾巴比雄蛇短，尾巴从肛门孔突然变细，肛门孔凹陷，用上述同样的方法用拇指按住肛门孔后面的几厘米，从后面向前按压没有一对“半阴茎“伸出。
二、乌梢蛇种蛇的选择
乌梢蛇母蛇通常在7~8月产卵，每次产卵7~30枚，孵化期为45~50天，母蛇在公母比例中占51%，受精卵占产卵数量的91.4%，自然孵化率64.6%，自然成活率30%。为了提高繁殖效率，蛇龄在3岁以上，体重在400克以上的体质强壮、无伤病、生长发育良好、活泼活跃、爬行灵活、蜷缩能力强、动作迅猛有力、繁殖能力强的优良种类蛇，配种雌性、雄性蛇的比例为5~8：1。
三、乌梢蛇交配产卵
乌梢蛇的繁殖期为每年的5~7月，蛇发情时按比例将雄蛇放入雌蛇群中，自由交配。为了检查雌蛇是否怀孕，用一只手轻轻捏住脖子，另一只手从雌蛇的腹部抚摸到肛门孔，怀孕的腹部有凹凸感的话，凹凸部分越接近肛门孔的话，表明此蛇离卵产出日期越近。如果发现凹凸处距离肛门孔仅2~3厘米，则表示该蛇即将分娩（一般1天内产卵），应将分娩的蛇关入蛇箱或产卵室分娩。雌蛇产卵没有固定的位置，发现蛇卵应立即收集孵化，防止蛇卵长时间暴露在阳光和风中，使蛇卵受温度和湿度不均等因素的影响降低蛇卵的孵化率。
四、乌梢蛇人工孵化
乌梢蛇孵化器多采用大口缸罐、桶或箱子作为容器，器底部铺上一层约30厘米厚的清洁沙土（沙土比例为3：1），湿度以手能握成团、松开即散为宜，并将其压实，然后把蛇的受精卵横卧（不直立）排放在容器内的砂土上，在卵子上加入约10厘米的沙土，高寒地区在孵化器内盖上棉花保温，将孵化器放在室内并盖上，防止老鼠、蚂蚁、蚊子等对蛇卵的侵害。注意保持28~30℃以上的有效孵化温度对稳定，低于20℃，孵化期延长，蛇卵难以孵化。温度高的话，尽管提前孵出小蛇，但畸形小蛇和死亡率会增加。经常喷水，使沙土保持绝对湿度在15%左右，每7~10天翻卵1次，检查其胚胎发育状况，发现未受精的卵和死亡的胚胎应立即捡出。
